摘要：目的建立一种超高效液相色谱（UHPLC-UV）波长切换法同时测定风寒感冒颗粒中D-苦杏仁苷、葛根素、橙皮苷等14种化学成分的含量，结合化学计量学分析不同来源样品的质量差异。方法色谱柱为AgilentPoroshellEC-C18（mm×2.1mm，2.7μm），以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱，切换波长（、、nm）对5家生产企业68批样品中14种化学成分含量进行测定；并使用雷达图分析、相似度评价、热图聚类分析和主成分分析法对数据进行统计分析。结果68批样品中各成分质量分数分别为D-苦杏仁苷0.～3.mg/g、3′-羟基葛根素0.～1.mg/g、葛根素0.～4.mg/g、3′-甲氧基葛根素0.～1.mg/g、葛根素-6″-O-木糖苷0.～0.mg/g、芹糖葛根素苷0.～2.mg/g、大豆苷0.～1.mg/g、升麻素苷0.～0.mg/g、5-O-甲基维斯阿米醇苷0.～1.mg/g、橙皮苷0.～8.mg/g、迷迭香酸0.～0.mg/g、水合氧化前胡素0.～0.mg/g、甘草酸0.～1.mg/g、氧化前胡素0.～0.mg/g。化学计量学分析表明，同一厂家不同批次样品的整体质量一致性较好，但不同厂家之间样品的整体质量一致性存在较大差异。结论建立的基于UHPLC波长切换法的多组分含量测定方法简便、重复性好、专属性强，可为风寒感冒颗粒的整体质量评控提供方法参考。

风寒感冒颗粒源于经典名方麻黄汤，由麻黄、葛根、紫苏叶、防风、桂枝、白芷、陈皮、苦杏仁、桔梗、甘草、干姜11味中药组方而成，具有解表发汗、疏风散寒的功效，用于治疗风寒感冒身热、头痛、咳嗽等症。该药现行质控标准主要是《卫生部药品标准》中药成方制剂第一册（标准中原名“风寒感冒冲剂”），标准的整体质控力较弱，仅有性状、制剂通则检查项[1]，缺少薄层鉴别和含量测定等质控方法。风寒感冒颗粒的生产企业较多，不同厂家、不同批次之间的整体质量和一致性评价至今尚无文献报道。目前其质控研究主要集中在盐酸麻黄碱、葛根素、橙皮苷、升麻素苷等1个或2个成分含量测定[2-4]，检测指标少，难以有效控制风寒感冒颗粒的整体质量。通过文献调研，本研究选择D-苦杏仁苷[5]、葛根素[6-8]、升麻素苷[9]、橙皮苷[10-11]、迷迭香酸[12]、甘草酸铵[13]等14个主要药味的特征化学成分作为指标，对风寒感冒颗粒的整体质量进行多组分化学评价。所选14个化学成分涵盖方中苦杏仁、葛根、防风、陈皮、紫苏叶、白芷、甘草7味药材，且药理活性与风寒感冒颗粒的临床应用有直接关联，这些化学成分的含量高低能在一定程度上反映风寒感冒颗粒的整体质量情况。由于选择的14个待测化学成分的最大吸收波长差异较大，不能在同一波长下同时测定，为兼顾各化学成分的最大吸收波长，提高灵敏度，减少干扰，本实验采用UHPLC波长切换法对市场占有率较高的5家生产企业的68批次样品进行含量测定，并进行化学计量学分析，以期能为风寒感冒颗粒的整体质量评控和标准修订提供一些参考。

1仪器与试药

1.1仪器

Thermo超高效液相色谱仪，配备二极管阵列检测器，美国赛默飞世尔科技公司；ThomovanquishUHPLC串联QExactiveplus四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱，美国赛默飞世尔科技公司；XPE26百万分之一电子天平，瑞士MettlerToledo公司；AE-十万分之一电子天平，德国赛多利斯公司；SKH超声仪，50kHz，上海科导超声仪器有限公司；10～μL移液枪，德国Eppendorf公司；Milli-Q超纯水制备系统，美国Millipore公司。

1.2试药

对照品葛根素（批号-，质量分数95.4%）、大豆苷（批号-203，质量分数93.3%）、升麻素苷（批号-212，质量分数96.2%）、5-O-甲基维斯阿米醇苷（批号-，质量分数97.4%）、迷迭香酸（批号-206，质量分数90.5%）、甘草酸铵（批号-220，质量分数97.7%）、橙皮苷（批号-，质量分数96.2%）、大豆苷元（批号112-202）由中国食品药品检定研究院提供；对照品D-苦杏仁苷（批号，质量分数98.0%）由成都普菲德生物技术有限公司提供；对照品3′-羟基葛根素（批号MUST-，质量分数99.59%）、3′-甲氧基葛根素（批号MUST-，质量分数98.47%）、葛根素-6″-O-木糖苷（批号MUST-，质量分数99.45%）、芹糖葛根素苷（批号MUST-，质量分数99.41%）、水合氧化前胡素（批号MUST-，质量分数99.95%）、氧化前胡素（批号MUST-，质量分数98.04%）、川陈皮素（批号MUST-18205，质量分数98.86%）由成都曼斯特生物科技有限公司提供。

色谱级甲醇、色谱级乙腈、质谱级甲酸，美国Fisher公司；色谱级磷酸，天津市科密欧化学试剂有限公司；分析纯甲醇、乙醇等试剂购自广东光华科技股份有限公司；水为超纯水。

1.3样品

68批次风寒感冒颗粒样品来自5个生产企业，信息见表1。

2方法与结果

2.1色谱、质谱条件

2.1.1色谱条件色谱柱为AgilentPoroshellEC-C18（mm×2.1mm，2.7μm）；以乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B）为流动相，梯度洗脱程序为0～32min，2%～14%A；32～57min，14%～18%A；57～80min，18%～50%A；体积流量为0.3mL/min；柱温为25℃；检测波长：0～20min为nm；20～22min为nm；22～45min为nm；45～58min为nm；58～61min为nm；61～80min为nm；进样量为5μL。UHPLC-Q-OrbitrapHRMS分析过程以0.1%甲酸水溶液为流动相B，其余条件同上。

2.1.2质谱条件离子源为HESI-II源；离子传输管温度℃，辅助气温度℃，辅助气压力10arb，鞘气压力35arb，喷雾电压3.50kV。扫描方式：正离子FullMS/dd-MS2模式，FullMS分辨率为FWHM，dd-MS2分辨率为FWHM，质荷比窗口宽度为m/z1，碰撞能梯度为20、40、60eV，扫描范围为m/z～0。

2.2溶液的制备

2.2.1混合对照品溶液的制备取D-苦杏仁苷、3′-羟基葛根素、葛根素、3′-甲氧基葛根素、葛根素-6″-O-木糖苷、芹糖葛根素苷、大豆苷、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、橙皮苷、迷迭香酸、水合氧化前胡素、甘草酸铵、氧化前胡素对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成含D-苦杏仁苷.1μg/mL、3′-羟基葛根素.8μg/mL、葛根素.4μg/mL、3′-甲氧基葛根素.6μg/mL、葛根素-6″-O-木糖苷51.5μg/mL、芹糖葛根素苷.3μg/mL、大豆苷.3μg/mL、升麻素苷46.9μg/mL、5-O-甲基维斯阿米醇苷97.2μg/mL、橙皮苷.2μg/mL、迷迭香酸28.5μg/mL、水合氧化前胡素44.9μg/mL、甘草酸铵.1μg/mL、氧化前胡素11.7μg/mL的混合对照品溶液。

2.2.2供试品溶液的制备取风寒感冒颗粒粉末4.0g，精密称定，置锥形瓶中，准确加入甲醇50mL，称定质量，超声提取30min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液5mL，挥干，残渣用50%甲醇溶解，并转移至5mL量瓶中，稀释至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.3方法学考察

2.3.1线性范围考察精密吸取“2.2.1”项下混合对照品溶液，稀释制得系列不同质量浓度的混合对照品溶液。按照“2.1.1”项色谱条件依次进样，记录色谱峰面积。以峰面积为纵坐标，化合物质量浓度为横坐标，绘制标准曲线，进行线性回归，结果见表2。结果表明，各成分在各自质量浓度范围内与其峰面积呈良好的线性关系。

2.3.2精密度试验取“2.2.1”项下混合对照品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件连续进样6次，记录峰面积，计算RSD。结果显示，14种待测化学成分峰面积的RSD为1.09%～2.28%，表明仪器精密度良好。

2.3.3稳定性试验取同一供试品溶液（S1），分别在0、4、8、12、16、24h进样测定，记录峰面积并计算RSD，结果显示，14种待测化学成分峰面积的RSD为0.30%～2.81%，表明供试品溶液在制备后24h内基本稳定。

2.3.4重复性试验取同一批样品（S1），按“2.2.2”项下方法，平行制备6份供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行检测，计算各成分含量。结果显示，14种待测化学成分质量分数的RSD为0.24%～2.93%，表明该测定方法重复性良好。

2.3.5加样回收率试验精密称取已知含量的样品粉末（S1）9份，每份取样量为供试品溶液制备时取样量的50%，以当前取样含量的0.5、1.0、1.5倍，分别精密加入混合对照品溶液，按“2.2.2”项方法制备供试品溶液，按含量测定方法测定，计算加样回收率。结果显示，14种待测化学成分的平均加样回收率为95.24%～.00%；RSD为1.18%～2.92%。表明该方法具有良好的准确度，方法可行。

2.4样品含量测定

按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件进样5μL分析，计算各成分含量。典型的色谱图见图1，含量测定结果见表3。

为了更直观地反映各生产企业样品中化学成分的含量分布情况，绘制了14种化学成分的平均含量分布情况雷达图。由于不同化学成分的含量差异较大，将5个生产企业样品中14种化学成分含量平均值分别进行加和，再以各生产企业每种化学成分的含量平均值与相应总和比较，得到比值，用比值绘制雷达图，结果见图2。结果显示，各化学成分含量比值的落点几乎没有重合，而且落点分布广，表明同一化学成分在不同企业样品中的差异较大。企业A的整体轮廓较大，说明该企业样品中14种化学成分含量均较高，提示质量可能较好；而企业E的整体轮廓明显小于其他企业，说明该企业样品中14种化学成分含量均偏低，提示从多组分化学含量高低的角度来评价该企业样品质量可能不佳。以D-苦杏仁苷为例，D-苦杏仁苷为苦杏仁中平喘止咳的主要活性成分[5]，企业A样品中的平均含量是企业E样品中平均含量的28.5倍（3.mg/gvs0.mg/g），且5个不同生产企业样品中D-苦杏仁苷的含量差异较大，这是值得